| [Člen (365WT)]Odpovědi [Číňan ] | Čas :2018-05-06 | Replikaci plasmidu v buňkách obecně dvou typů: blízký řízené a kontrolované uvolnění bývalý replikovat pouze v určitých fázích buněčného cyklu, kdy chromozomální replikaci, nemůže se replikovat, obvykle každá buňka obsahuje pouze jeden. Nebo několik molekul plazmidu, jako je faktor F. Posledně uvedený plazmid může být replikován kdykoli během buněčného cyklu, přičemž v každé buňce je mnoho kopií, typicky více než 20, jako je plazmid Col El..Při použití inhibitorů syntézy bílkovin - při chloramfenikol, syntézy proteinů v buňkách, replikace chromozomální DNA a dělení buněk byly inhibovány, kompaktní replikace plasmidu zastavil a uvolněný replikaci plazmidu, aby i nadále, amplifikace číslo kopií plasmidu být snížen z více než 20 na 1000-3000, plasmidová DNA z celkového obsahu DNA v této době může být zvýšen z původních 2% na 40-50% za použití stejného systému replikace nemohou koexistovat různé plasmidy ve stejné hostitelské buňce, když je zaveden do stejných dvou plasmidů současně když buňky replikovat a přiřadit je k procesu v dílčích buněk navzájem konkurují, v některých buňkách, plazmid dominantní, zatímco jiný plasmid má převahu v jiných buňkách.Po několika generacích buněčného růstu se ztratí menší počet plazmidů, takže v buňkách je pouze dva plazmidy. Tento jev se nazývá neslučitelnost plazmidu..
Užitečným nástrojem pro šíření a expresi požadovaného fragmentu DNA je vektor nazvaný vektor, který je dodáván do recipientních buněk technologií rekombinantní DNA. Bakteriální plazmidy se běžně používají v technologii rekombinantní DNA. Samotná plasmidová molekula je genetickou strukturou obsahující replikační funkci. Plazmid také nese nějakou genetickou informaci, takže poskytne hostitelské buňce některé genetické vlastnosti. Jeho schopnost samoreprodukce a genetické informace, které nese, jsou mimořádně užitečné při manipulaci s rekombinantní DNA, jako je amplifikace a screening.
Plazmidové vektory jsou uměle vytvořeny na základě přirozených plazmidů, aby se přizpůsobily laboratorním operacím. Ve srovnání s přirozenými plazmidy obvykle plazmidové vektory nesou jeden nebo více selekčních markerových genů (jako jsou geny odolné proti antibiotikům) a umělé. Syntéza sekvencí více míst klonování obsahujících vícenásobná rozpoznávací místa pro restrikční endonukleázu a odstranění většiny neesenciálních sekvencí pro minimalizaci molekulové hmotnosti pro operace genetického inženýrství. Většina plasmidových vektorů nese určitou všestrannost Jako pomocné sekvence tyto použití zahrnují vizuální identifikaci rekombinantních klonů histochemickými metodami, generování jednovláknové DNA pro stanovení sekvence, in vitro transkripci sekvencí cizích DNA, identifikaci orientace inzertu, expresi cizích genů apod..A v podstatě ideální klonovací vektory by některé z těchto vlastností: ⑴ malé molekulové hmotnosti, více kopií, řízené relaxace; ⑵ jednom místě řezání různé obvyklé restrikční endonukleázou, ⑶ může být vložena do většího segmentu cizí DNA; ⑷ má dvě nebo více genetických markerů, aby se usnadnilo identifikaci a detekční .⑸ neškodný pro hostitelské buňky. plasmidový vektor používá, je obvykle mezi velikostí 1 KB až 10 kb, jako je například pBR322, série PUC, pGEM série, PET série a pBluescript (ve zkratce pBS) a tak dále..
Granule jsou malé molekuly dvouvrstvých kruhových DNA, které jsou nahé, mají jednoduchou strukturu, nezávislou na bakteriální DNA a mají schopnost samoreprodukce. V genetickém inženýrství se plazmidy často používají jako vektory pro zajímavé vektory. Existuje jedno nebo více míst štěpení restrikčních enzymů na plazmidové DNA molekule pro inzerci cizích DNA fragmentů (genů). Plazmid nesoucí exogenní DNA fragment vstupuje do recipientní buňky a samy se replikuje v buňce nebo se integruje do chromozomální DNA a replikuje se synchronně s chromozomální DNA. Na molekulách plazmidové DNA existují speciální markerové geny, jako je gen rezistence na tetracyklin, gen rezistence na ampicilin a další markerové geny, pro identifikaci a selekci rekombinantní DNA.
Bylo zjištěno, že bakteriální plazmidy mít stovky, většina známých bakteriálních plazmidů jsou uzavřeny kruhovou molekulu DNA (tzv cccDNA). Molekulová hmotnost je obvykle malá bakteriální plasmid, bakteriální nucleoid je přibližně 0,5% . ~ 3% v závislosti na velikosti molekulové hmotnosti, se plasmid lze rozdělit zhruba do velikostních kategorií: třída velké molekulové hmotnosti větší než 40 x 106, třída malé molekulové hmotnosti je 10 x 106 nebo méně (malý počet relativní molekulová hmotnost mezi oběma plazmidy) počet plasmidu na buňku je určena především charakteristické kopií plasmidu sám.Podle povahy replikace mohou být plazmidy rozděleny do dvou typů: jeden je přísný plazmid a pokud se chromozomy buněk jednou replikují, plazmid také jednou replikuje a v každé buňce je pouze 1-2 plazmidů, druhé je volný plazmid. při zastavení chromozomální replikaci stále dochází k replikaci, obecně asi 20 plasmidů na buňku. replikace těchto plasmidů je pod kontrolou hostitelské buňky relaxace, přičemž každá buňka obsahuje 10-200 kopií, je-li jisté lékové inhibici procesu syntézy bílkovin hostitel se také vyrobit kopie zvýšené plazmid počtu kopií. jako součást dříve uvolněné plasmidu pBR322 plazmidu tj., aby se s postupem, aby se dosáhlo vyšší číslo chloramfenikol kopii č obecně vyšší molekulovou hmotnost plasmid je přísnost.Plazmidy s menší molekulovou hmotností jsou volné typy. Replikace plazmidů je někdy spojena s jejich hostitelskými buňkami. Některé plazmidy se v E. coli replikují a uvolňují v Proteus.. |
|
